使用DNS法测定总糖含量的详细内容：
原理
DNS法全称3,5二硝基水杨酸法，其原理是基于在NaOH和丙三醇存在下，3,5二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收峰，由于在一定浓度范围内，还原糖的含量与溶液的光吸收值呈线性关系，因此可以通过比色法测量溶液的吸光度来计算样品中的含糖量。
试剂与器材
| 试剂或器材名称 | 详细信息 |
|---|---|
| 葡萄糖标准溶液 | 1mg/ml，准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml |
| DNS试剂 | 称取6.3g 3,5二硝基水杨酸并量取262ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾钠的热溶液中（182g酒石酸钾钠溶于500ml水中），再加5g结晶酚和5g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000ml，贮于棕色瓶中 |
| 碘碘化钾溶液 | 称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中 |
| 6N NaOH | 称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中 |
| 1%酚酞指示剂 | |
| 6mol/L HCl溶液 | |
| 分光光度计 | 用于测量吸光度 |
| 天平 | 精确称量样品和试剂 |
| 水浴锅 | 提供恒温水浴环境 |
| 电炉 | 用于加热 |
| 试管若干 | 进行反应和测量 |
操作步骤
（一）葡萄糖标准曲线制作
取8支15mm×180mm试管，按表1加入不同体积的葡萄糖标准液和蒸馏水。
表1 葡萄糖标准曲线制作试剂添加表 |管号|葡萄糖标准液（ml）|蒸馏水（ml）|葡萄糖含量（mg）| ||||| |0|0|1.0|0| |1|0.2|0.8|0.2| |2|0.4|0.6|0.4| |3|0.6|0.4|0.6| |4|0.8|0.2|0.8| |5|1.0|0|1.0|
- 将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入10ml蒸馏水，摇匀。
- 在λ = 540nm处测定吸光度，以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
（二）样品中还原糖的提取
- 准确称取0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水（约2ml）调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀。
- 于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出。
- 过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
（三）样品总糖的水解及提取
- 准确称取0.5g小麦(淀)粉，放在锥形瓶中，加入6mol/L HCl10ml，蒸馏水15ml，在沸水浴中加热。
- 取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I KI溶液检查水解是否完全，如已水解完全，则不呈现蓝色。
- 水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
（四）样品中含糖量的测定
按表2进行操作。
表2 样品含糖量测定试剂添加表 |试剂空白/样品溶液|还原糖/总糖|蒸馏水（ml）|DNS试剂（ml）| ||||| |试剂空白| |1.0|1.5| |样品溶液|还原糖| |1.5| ||总糖| |1.5|
将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入10ml蒸馏水，摇匀，在λ = 540nm处测定吸光度，根据标准曲线计算样品中的还原糖和总糖含量。
结果处理
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量： [含糖量(\%)=\frac{C\times V}{m\times 1000}\times 100\%] 式中：(C)──还原糖或总糖提取液的浓度，(mg/ml)；(V)──还原糖或总糖提取液的总体积，(ml)；(m)──样品重量，(g)；(1000)──(mg)换算成(g)的系数。
注意事项
- 实验过程中要注意控制反应条件,如温度、时间等，以保证实验结果的准确性和重复性。
- DNS试剂应现用现配,或贮于棕色瓶中避光保存，防止变质。
- 在测定吸光度时,要确保比色皿的清洁和透光性，避免影响测量结果。
相关问题与解答
问题1：DNS法测定总糖含量时，为什么要进行水解处理？ 解答：因为样品中的总糖包括非还原糖，而DNS试剂只能与还原糖发生显色反应，通过水解处理，可以将非还原糖转化为还原糖，从而能够使用DNS法测定总糖含量。
问题2：如果DNS法测定的结果偏高，可能是什么原因？ 解答：可能的原因有以下几点，一是样品中含有其他干扰物质，这些物质也可能与DNS试剂发生反应，导致吸光度偏高，从而使计算结果偏高；二是在操作过程中，如加热时间过长、温度过高等，可能会引起糖类的分解或其他副反应，影响测定结果；