S法测还原糖浓度，需先制备DNS试剂，再与待测液反应，通过
DNS法测还原糖浓度详细步骤
原理
在碱性条件下，3,5 二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后，DNS被还原生成棕红色的3 氨基 5 硝基水杨酸，而还原糖则被氧化成糖酸，在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的颜色深浅程度成一定比例关系，即与吸光度值呈线性关系，通过测定反应产物在特定波长（通常为540nm）处的吸光度，并与标准曲线对比,可计算出样品中还原糖的浓度。
试剂准备
| 试剂名称 | 配制方法 | 用途 |
|---|---|---|
| DNS试剂 | 称取6.3g DNS，溶于262mL 2mol/L的NaOH溶液中，再加入500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液，然后加入5g重蒸酚和5g亚硫酸氢钠，搅拌溶解后冷却定容至1000mL，贮存于棕色瓶中 | 与还原糖反应显色 |
| 葡萄糖标准溶液（1mg/mL） | 准确称取经80℃烘至恒重的分析纯无水葡萄糖1g，加少量水溶解，加5mL浓盐酸，用蒸馏水定容至1000mL | 绘制标准曲线 |
标准曲线制作
- 取试管编号：取6支试管，分别编号为0 5。
- 加入试剂：按表1所示依次向各试管中加入葡萄糖标准溶液、蒸馏水和DNS试剂。
| 试管编号 | 葡萄糖标准溶液（mL） | 蒸馏水（mL） | DNS试剂（mL） |
|---|---|---|---|
| 0 | 0 | 1 | 5 |
| 1 | 2 | 8 | 5 |
| 2 | 4 | 6 | 5 |
| 3 | 6 | 4 | 5 |
| 4 | 8 | 2 | 5 |
| 5 | 0 | 0 | 5 |
- 反应与测定：将各试管充分混匀，在沸水浴中加热5分钟，取出后迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至相同体积（如25mL），以0号管作为参比,在540nm波长处测定各管的吸光度。
- 绘制标准曲线：以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
样品测定
- 样品预处理：对于固体样品，粉碎后溶解于蒸馏水，离心取上清液；液体样品直接稀释至合适浓度，若样品含有非还原糖，需先进行水解处理（如加入盐酸水解，再用NaOH中和）。
- 显色反应：取适量样品液于试管中，加入与标准曲线制作时等量的DNS试剂，混匀后在沸水浴中加热5分钟,迅速冷却至室温。
- 比色测定：用分光光度计在540nm处测定吸光度,根据标准曲线计算样品中还原糖的浓度。
相关问题与解答
问题1：DNS试剂为什么需要避光保存？
解答：DNS试剂中的3,5 二硝基水杨酸在光照下可能会发生分解或变质，导致试剂失效，影响实验结果的准确性，DNS试剂需要避光保存,通常贮存于棕色瓶中。
问题2：如果样品中还原糖浓度过高，对测定结果有什么影响？如何解决？
解答：如果样品中还原糖浓度过高，吸光度可能会超出标准曲线的线性范围,导致测定结果不准确。
