S法酶活计算需先制作葡萄糖标准曲线，测得还原糖含量，再根据酶活力单位定义计算，如每分钟产生1μmol还原糖的酶量定义为一个酶活力单位
S法（3,5二硝基水杨酸法）是一种常用的测定酶活力的方法，以下是其计算酶活的详细步骤：
原理
DNS在碱性条件下与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内，颜色的深浅与还原糖的含量成正比，通过测定反应体系中还原糖的生成量，进而计算出酶的活力。
标准曲线制作
- 葡萄糖标准溶液配制：精确称取干燥至恒重的葡萄糖一定量，用蒸馏水溶解并定容，配制成一系列不同浓度的葡萄糖标准溶液，可配制浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的葡萄糖标准溶液。
- 显色反应：取不同浓度的葡萄糖标准溶液各一定体积（如1mL），分别加入比色管中，再依次加入DNS试剂、沸水浴加热一定时间（通常为5 7min），冷却后用蒸馏水定容至相同体积。
- 吸光度测定：以去离子水作为空白对照，在特定波长（一般为530 550nm）下，用紫外分光光度计测定各管的吸光度值。
- 绘制标准曲线：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。
酶活力测定
- 反应体系构建：根据具体酶和底物的特性，设计合适的反应体系，一般包括酶液、底物溶液以及适宜的缓冲液等，对于纤维素酶，可将酶液与1%CMC Na溶液混合；对于淀粉酶，可将酶液与1%可溶性淀粉溶液混合。
- 反应条件控制：将反应体系置于特定的温度和pH条件下进行反应，反应时间根据酶的性质和实验要求确定，反应结束后，立即加入DNS试剂终止反应，并进行沸水浴加热显色。
- 样品处理与测定：冷却后，将反应液过滤或离心，取上清液适当稀释后，在与标准曲线相同的波长下测定吸光度值。
酶活力计算
- 根据标准曲线求还原糖含量：将测定的样品吸光度值代入标准曲线的回归方程，计算出反应体系中生成的还原糖浓度。
- 计算酶活力单位：酶活力单位的定义通常是在一定条件下，每分钟催化底物生成1μmol还原糖所需的酶量为一个酶活力单位（U），根据以下公式计算酶活力： [酶活力（U/mL）=\frac{C\times V\times n}{t\times m}] (C)为根据标准曲线求得的还原糖浓度（μmol/mL），(V)为反应体系的总体积（mL），(n)为稀释倍数，(t)为反应时间（min），(m)为加入的酶液体积（mL）。
注意事项
- 标准曲线制作：葡萄糖标准溶液的配制要准确，浓度梯度设置合理，以确保标准曲线的线性良好，显色反应的条件（如沸水浴时间、DNS试剂用量等）要保持一致，以提高测定的准确性。
- 酶活力测定：反应体系的组成和反应条件要严格控制，确保酶与底物充分反应，同时避免其他因素对酶活力的影响，在加入DNS试剂终止反应时，要迅速混匀，以保证反应及时停止。
- 数据处理：测定吸光度值时，要保证比色皿的清洁和透光性，避免误差，计算酶活力时，要注意单位的换算和数据的合理性检查。
相关问题与解答
- 问题：如果样品颜色过深，对DNS法测定酶活力有影响吗？如何解决？ 解答：样品颜色过深可能会干扰吸光度的测定，导致结果不准确，可以通过适当稀释样品来降低颜色深度，或者采用空白对照的方法来消除样品本身颜色的影响，即在相同的反应条件下，以不加底物的酶液作为空白对照，测定其吸光度值，并在计算样品吸光度时减去空白对照的吸光度值。
- 问题：不同来源的酶液在DNS法测定酶活力时，反应条件是否需要调整？ 解答：不同来源的酶液其最适反应条件（如温度、pH值等）可能会有所不同，因此在进行DNS法测定酶活力时，需要根据酶的来源和特性，对反应条件进行适当的调整和优化，以确保酶能够充分发挥其催化活性，使测定结果