DNS试剂可现配，需现用现配并避光保存，久置
DNS试剂可以现配吗？使用方法及注意事项详解
DNS试剂的基本概念
DNS试剂全称为3,5二硝基水杨酸试剂（Dinitroperizolic Acid Reagent），是一种常用于还原糖定量检测的化学试剂，其原理是基于还原糖与DNS在沸水浴条件下发生氧化还原反应，生成棕红色络合物，通过比色法测定吸光度，从而计算样品中还原糖的含量。
核心反应：
- 还原糖（如葡萄糖） + DNS试剂 → 沸水浴 → 棕红色产物（AFP值与浓度相关）
DNS试剂的配制方式
DNS试剂的配制方式分为现配现用和预制储存两种，具体选择需根据实验需求和条件判断。
| 配制方式 | 优点 | 缺点 |
|---|---|---|
| 现配现用 | 保证试剂活性，避免沉淀或分解 | 耗时较长，需精确称量 |
| 预制储存 | 快速取用，适合高频次实验 | 长期储存可能失效，需注意保存条件 |
现配DNS试剂的可行性分析
现配的优势
- 稳定性高：现配试剂未经过长时间储存，成分稳定，反应灵敏度更高。
- 灵活性强：可根据实验需求调整配制量，避免浪费。
- 避免沉淀：DNS试剂长期放置易产生沉淀（如3,5二硝基水杨酸结晶），现配可确保均一性。
现配的局限性
- 时间成本：需称量多种成分并溶解，耗时约3040分钟。
- 操作要求：需精准控制化学试剂的用量（如氢氧化钠、酒石酸钾钠等）。
现配DNS试剂的详细步骤
材料准备
| 试剂 | 用量 | 作用 |
|---|---|---|
| 3,5二硝基水杨酸 | 1g | 主反应物质 |
| 氢氧化钠（NaOH） | 16g（配成20%水溶液） | 提供碱性环境，促进显色反应 |
| 酒石酸钾钠（C₄H₄KNaO₆） | 30g | 稳定pH值，增强试剂稳定性 |
| 苯酚（C₆H₅OH） | 5g | 防止微生物污染 |
| 无水亚硫酸钠（Na₂SO₃） | 5g | 抗氧化剂，延长试剂使用寿命 |
| 蒸馏水 | 定容至100mL | 溶剂 |
配制流程
-
溶解3,5二硝基水杨酸
将1g DNS加入20mL蒸馏水，搅拌并加热至完全溶解（温度≤50℃）。 -
添加氢氧化钠溶液
缓慢加入20% NaOH溶液20mL，混匀后溶液呈橙红色。
-
补充酒石酸钾钠
加入30g酒石酸钾钠，搅拌至溶解，溶液颜色变为深褐色。 -
添加苯酚与亚硫酸钠
依次加入0.5g苯酚和0.5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解。 -
定容与过滤
用蒸馏水定容至100mL，过滤后转移至棕色瓶中备用。
现配与预制试剂的对比实验数据
| 指标 | 现配试剂 | 预制试剂（储存3个月） |
|---|---|---|
| 显色时间（沸水浴） | 5分钟 | 8分钟（反应速率下降） |
| 吸光度稳定性（1小时内） | ±0.01（标准差） | ±0.05（标准差） |
| 葡萄糖回收率（mg/mL） | 98%102% | 85%95%（部分降解） |
现配试剂的保存与使用建议
保存条件
- 现配试剂：需在4小时内使用完毕，避免光照分解。
- 短期储存：若需放置，需密封后于4℃避光保存，不超过24小时。
使用注意事项
- 现配现用优先：推荐用于关键实验（如标准曲线制作）。
- 分装保存：若需多次使用，可分装后冷冻（20℃），但重复冻融会降低活性。
- 避免污染：吸取试剂时使用专用移液器，防止交叉污染。
常见问题解答
Q1：现配DNS试剂时，氢氧化钠的作用是什么？
A1：氢氧化钠提供强碱性环境（pH≈1012），促进3,5二硝基水杨酸与还原糖的显色反应，同时中和反应体系中的酸性副产物。
Q2：现配试剂出现沉淀怎么办？
A2：沉淀可能由DNS未完全溶解或低温储存导致，可重新加热至50℃并搅拌，若仍不溶解需重新配制。
延伸问题与解答
问题1：DNS试剂配制时，酒石酸钾钠的作用是什么？
解答：酒石酸钾钠（C₄H₄KNaO₆）作为缓冲剂，可维持反应体系的pH值稳定（通常控制在910），避免氢氧化钠过量导致DNS分解，同时提高试剂对热稳定性的耐受性。
问题2：如何判断DNS试剂是否失效？
解答：可通过以下方法检验：
- 空白对照测试：用蒸馏水代替样品，按相同条件显色，若空白组吸光度＞0.1（500nm波长），说明试剂本底过高，可能失效。
- 标准品验证：用已知浓度的葡萄糖溶液测试，若回收率低于80%，则试剂需重新