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DNS法测定还原糖步骤

实验原理

DNS（3,5二硝基水杨酸）比色法是一种常用的测定还原糖含量的方法，其基本原理是在碱性条件下，DNS与还原糖发生氧化还原反应，生成棕红色的氨基化合物，该产物在煮沸条件下显色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系,通过比色法即可计算糖含量。

所需试剂和材料

1. DNS试剂：包含3,5二硝基水杨酸、氢氧化钠、丙三醇等成分。
2. 还原糖标准溶液：如葡萄糖溶液。
3. NaOH溶液：0.1 mol/L。
4. 丙三醇。
5. 蒸馏水。
6. 分光光度计。
7. 试管或比色皿。
8. 恒温水浴锅。
9. 移液枪及枪头。
10. 容量瓶。

实验步骤

DNS试剂的制备

将6.3 g DNS溶解于少量热蒸馏水中，加入262 ml 2 mol/L NaOH和456 ml 丙三醇，用蒸馏水定容至1000 ml,储存于棕色瓶中备用。

绘制葡萄糖标准曲线

1. 配置不同浓度的葡萄糖标准溶液：例如0.1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.3 mg/ml、0.4 mg/ml、0.5 mg/ml。
2. 取各浓度葡萄糖溶液1 ml，分别置于25 ml容量瓶中。
3. 加入1 ml DNS试剂,摇匀。
4. 沸水浴加热5分钟，冷却后用蒸馏水定容至25 ml。
5. 以蒸馏水为空白对照，在540 nm波长下测定吸光度。
6. 绘制葡萄糖浓度与吸光度的曲线图,即标准曲线。

样品处理与测定

1. 取待测样品溶液1 ml，加入1 ml DNS试剂,摇匀。
2. 沸水浴加热5分钟，冷却后用蒸馏水定容至25 ml。
3. 以蒸馏水为空白对照，在540 nm波长下测定吸光度。
4. 根据标准曲线计算样品中的还原糖含量。

实验注意事项

1. DNS试剂需现配现用,避免长时间存放导致失效。
2. 加热时间要严格控制,过长可能导致颜色变化不稳定。
3. 操作过程中应戴手套和护目镜,防止试剂对皮肤和眼睛造成伤害。
4. 使用分光光度计前需预热并校准,确保测量结果的准确性。

相关问题与解答

Q1: DNS试剂的稳定性如何？需要如何保存？

A1: DNS试剂在碱性条件下较为稳定，但长时间暴露在空气中可能会逐渐分解，建议将其储存在棕色瓶中，并放置在阴凉干燥处，避免阳光直射，试剂配制好后应尽快使用,不宜长期保存。

Q2: 如果样品中含有其他干扰物质，如何消除影响？

A2: 如果样品中含有其他干扰物质，可以通过适当的预处理方法来去除或减少其影响，可以使用活性炭吸附法去除色素等杂质；或者采用透析法去除小分子干扰物。