葡萄糖加DNS显色”的详细内容：
实验原理
在碱性条件下,葡萄糖与DNS（3,5二硝基水杨酸）试剂发生氧化还原反应，葡萄糖被氧化成糖酸及其他产物，而DNS则被还原为棕红色的3氨基5硝基水杨酸，在一定浓度范围内，葡萄糖的含量与生成的棕红色物质颜色的深浅呈正相关关系，通过在特定波长下测定溶液的吸光度值，再对照标准曲线，就可以计算出样品中葡萄糖的含量。
试剂配制
（一）DNS试剂配制
| 试剂名称 | 用量 | 备注 |
|---|---|---|
| DNS（3,5二硝基水杨酸） | 3g | 准确称取 |
| 2mol/L NaOH溶液 | 262ml | |
| 酒石酸钾钠（C₄H₄O₆KNa·4H₂O） | 182g（溶于500ml热水中） | 需先配成热溶液 |
| 结晶酚（C₆H₅OH） | 5g | |
| 无水亚硫酸钠（Na₂SO₃） | 5g | |
| 蒸馏水 | 定容至1000ml | 最后定容，贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用 |
（二）葡萄糖标准溶液配制
| 步骤 | 操作详情 |
|---|---|
| 称量 | 取适量葡萄糖装入称量瓶，于85°C烘箱烘至恒重，放入干燥器冷却，精确称取干燥后的葡萄糖0.5g。 |
| 溶解定容 | 加蒸馏水溶解，转移至50ml容量瓶定容，制成10g/L的葡萄糖溶液。 |
| 稀释 | 分别取蒸馏水稀释成不同浓度的葡萄糖标准液，浓度为0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L、1.0g/L、1.2g/L、1.4g/L、1.6g/L、1.8g/L、2.0g/L |
标准曲线制作
（一）操作步骤
取不同浓度的葡萄糖标准液1.0ml于25ml刻度试管中，按下表加入试剂，沸水中显色5min，用冷水冷却到室温后，加水至25ml，摇匀，再在550nm处用分光光度计测定上述各溶液的A₅₅₀值，以葡萄糖浓度为纵坐标，A₅₅₀值为横坐标，作出标准曲线并回归出标准方程。
| 试管号 | 葡萄糖标准液浓度/(g/L) | 加量/ml | DNS试剂/ml |
|---|---|---|---|
| 0 | 0 | 0 | 0 |
| 1 | 2 | 0 | 2 |
| 2 | 4 | 0 | 2 |
| 3 | 6 | 0 | 2 |
| 4 | 8 | 0 | 2 |
| 5 | 0 | 0 | 2 |
| 6 | 2 | 0 | 2 |
| 7 | 4 | 0 | 2 |
| 8 | 6 | 0 | 2 |
| 9 | 8 | 0 | 2 |
| 10 | 0 | 0 | 2 |
（二）注意事项
- 加热时间和温度要严格控制,确保显色反应充分进行且各管条件一致。
- 比色皿要洁净,避免残留物质影响吸光度测定。
- 测定吸光度时要迅速,防止溶液颜色变化影响结果准确性。
样品测定
（一）样品准备
将待测样品进行适当稀释,使糖浓度处于标准曲线的线性范围内（一般建议在0.1 1.0mg/ml），记录稀释倍数。
（二）测定步骤
取稀释后的样品液1.0ml于15ml刻度试管中，加入DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足至15ml刻度，在540nm波长下测定光密度，从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数，再根据稀释倍数计算出样品中糖含量。
相关问题与解答
问题1：DNS试剂配制时，为什么需要贮于棕色瓶中且室温放置一周后使用？
解答：DNS试剂对光敏感，贮于棕色瓶中可以避光，防止试剂因光照发生分解等变化，保证试剂的稳定性，而室温放置一周后使用，是为了让试剂中的各种成分充分反应和融合，使其性质更加稳定，确保在实验过程中能够准确地与葡萄糖发生反应，从而保证实验结果的准确性。
问题2：在样品测定中，为什么要对样品进行适当稀释？
解答：如果样品中葡萄糖浓度过高，超出了标准曲线的线性范围，那么测定的吸光度值可能不在标准曲线所能准确对应的范围内，导致计算结果不准确，而将样品适当稀释，使糖浓度处于标准曲线的线性范围内（一般建议在0.1 1.0mg/ml），这样可以保证通过测定吸光度值能够在标准曲线上准确找到对应的葡萄糖浓度，从而根据稀释倍数计算出样品中准确的糖含量，提高实验结果的准确性和可靠性。
葡萄糖加DNS显色法是一种常用的测定还原糖含量的方法。