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1、实验原理

3,5－二硝基水杨酸（DNS）在碱性条件下（通常含有NaOH和丙三醇）与还原糖共热后，被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中，此氨基化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定浓度范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度呈正比，通过比色法可测定样品中的还原糖含量。

2、试剂配制

DNS试剂的配制

甲液：溶解6.9克结晶酚于15.2毫升10%氢氧化钠溶液中，用水稀释至69毫升，再加入15.2毫升10%氢氧化钠溶液。

乙液：称取255克酒石酸钾钠溶于300毫升10%氢氧化钠溶液中，再加入880毫升10%氢氧化钠溶液。

丙液：称取10克DNS溶于200毫升水中，煮沸溶解（加热时注意安全）。

DNS试剂：将上述甲、乙、丙三种溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中，室温放置7天后使用。

葡萄糖标准溶液：精确称取干燥恒重的葡萄糖1.000克，加蒸馏水溶解并定容至1000毫升，得到1毫克/毫升的葡萄糖标准溶液。

3、操作步骤

制作标准曲线

取7支大试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2毫升葡萄糖标准溶液，用蒸馏水补足至2毫升。

向每管加入1.5毫升DNS试剂，混匀后沸水浴加热5分钟，冷却至室温，加水定容至25毫升，以空白管调零点，在540nm波长下测吸光度，绘制标准曲线。

样品测定

准确吸取待测样品溶液2毫升于试管中，加入1.5毫升DNS试剂，混匀后沸水浴加热5分钟，冷却至室温，加水定容至25毫升。

在540nm波长下测吸光度，从标准曲线中查出相应的还原糖毫克数。

4、数据记录与处理

记录各标准溶液和样品溶液的吸光度值，绘制标准曲线（以还原糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标）。

根据样品溶液的吸光度值，在标准曲线上查出对应的还原糖浓度。

计算样品中还原糖的含量（如以葡萄糖计，可根据样品的稀释倍数和取样量计算出还原糖的质量分数）。

5、注意事项

DNS试剂应现配现用，存放时间过长会影响显色效果。

加热过程中要注意防止溶液爆沸溅出，确保安全。

比色时，溶液应冷却至室温，以保证吸光度测量的准确性。

不同品牌的DNS试剂可能存在差异，使用前需进行校准或验证。

以下是关于还原糖测定DNS法的问题解答：

1、DNS法测定还原糖的原理是什么？

DNS法测定还原糖的原理是在碱性条件下（通常含有NaOH和丙三醇），3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后，被还原生成氨基化合物，该化合物在过量的NaOH碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定浓度范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度呈正比，通过比色法可测定样品中的还原糖含量。

2、DNS法测定还原糖时需要注意哪些事项？

DNS法测定还原糖时需要注意以下事项：DNS试剂应现配现用，存放时间过长会影响显色效果；加热过程中要注意防止溶液爆沸溅出，确保安全；比色时，溶液应冷却至室温，以保证吸光度测量的准确性；不同品牌的DNS试剂可能存在差异，使用前需进行校准或验证。